23966上海鼎桑代理

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  上海鼎桑生物科技有限公司一家專注于生命科學的科技企業，由在國內科研試劑領域有著豐富從業經驗的技術團隊和管理團隊組建而成，專營進口生物試劑，科學儀器，實驗消耗品等。
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23966上海鼎桑代理

美國POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生產和經營LIFE SCIENCES生命科學（膠體金,不含甲醛的甲醇等），病理學和顯鏡學 微球和粒子和磁珠各種單體和聚體等產品。polysciences公司是世界上zui大zui全的23966上海鼎桑代理 多聚化合物供應商,同時是世界*的免疫學,組織化學試劑耗材供應商.

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轉染試劑線性PEI溶液的配制（1mg/ml）

聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子，即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(proton sponge)體。PEI，可用作轉染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明，分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966轉染效率zui高。

下面將主要介紹polysciences 線性PEI(#23966)的產品特性及其溶液的配制過程。

1. 產品特性:

產品名稱：線性聚乙烯亞胺(PEI)

2. 溶液配制

此指導說明書是經polysciences公司研究，測試及其客戶反饋的后編寫的。下面推薦一種簡單適用而的方法，講述如何配制濃度為1mg/mL的轉染試劑的配制。

材料：

1g #23966、1L 純水（Milli-Q®純水，注射用水（WFI），或類似的生物級水）、12 M鹽酸、10 M*、一次性0.1-0.2µm PES真空無菌過濾器、無菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。

器材：

1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、核準pH計、2支1 mL塑料移液管、托盤、聚四氟乙烯（PTFE）攪拌棒、真空泵

配制過程：

1g #23966——900mL水溶解——攪拌、加熱（60-80°C）——加HCl調pH到2.0左右——蓋上燒杯，攪拌3h（直至粉末*溶解）——冷卻至室溫——加NaOH調pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水補足至1L——真空過濾消毒——分裝，-20°C保存。

備注：加熱或加酸都有助于PEI溶解。當然酸可能不用加那么多，詳細用量可試加一點攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那么低。

試劑儲存：

冷凍部分溶液可在-20°C保存長達一年；部分解凍的溶液可在4°C保存2周，不可反復凍融。

粉末儲存：

未開封的粉末有效期兩年。可在室溫下保存直至使用。

轉染操作流程：(瞬時轉染方法) 轉染效率（部分數據參考，本數據來源于網絡，不作為售后投訴依據）

1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細

胞并計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養的器皿，每個孔置

入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其

升至室溫。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養基稀釋適

量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性 PEI 轉

染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉染試劑滴

加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以

形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14

mL 離心管。

3. 轉染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI 復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在

無血清條件下轉染時，去除生長培養基，替換成無血清培養基，然后滴 DNA-PEI 復

合物。轉染 3 h 后，添加½體積的包含 30%血清的生長培養基。

4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2 培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉

染后快 的話7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

細胞種類 中文名稱 PEI 轉染效率

HEK293 人胚腎細胞 90%-95%

293-T 人胚腎細胞 90%-95%

CHO-K1 倉鼠卵巢細胞 80%-90%

U251 人源神經膠質瘤細胞 80%-90%

Hela 人源宮頸ai細胞 70%-80%

COS7 猴 SV40 轉化腎細胞 70%-80%

HepG2 人源肝癌細胞 70%-80%

NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細胞 60%-70%

膠質瘤干細胞 人源膠質瘤干細胞 60%-70%

Patu8988 人源胰腺癌細胞 60%-70%

U2OS 人源骨肉瘤細胞 60%-70%

轉染試劑和 DNA 配比數據

細胞型號 培養基 每孔細胞數 DNA 的量 轉染試劑量 和培養基混合 4-6h

293H DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293FT DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293E DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293F DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

COS7 DMEM 1.5×10

4

0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS

hela DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS

Caco2 MEM 3.5×10

4

0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS

BHK21 MEM 2×10

4

0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS

CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10

4

0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS

RAW264.7 DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS

MCF7

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat

2×10

4

0.1µg 0.25µL

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat+10%FBS

SW480 IMDM 3×10

4

0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS

MDCK DMEM 4×10

4

0.6µg 1µL DMEM+10%FBS

CHO-K1 IMDM+Pro 3×10

4

0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS

HepG2 DMEM 3×10

4

0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS

A549 DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS

NIH/3T3 DMEM 1.5×10

4

0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS

vero DMEM 3×10

4

0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS

sf9 SIM SF 5×10

4

0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS